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O método citogenético estuda. Métodos genéticos

Métodos citogenéticos (cariotípicos, cariotípicos) são usados principalmente no estudo de cariótipos de indivíduos individuais.

A essência deste método é estudar a estrutura dos cromossomos individuais, bem como as características do conjunto de cromossomos das células humanas na saúde e na doença. Objetos convenientes para isso são linfócitos, células epiteliais bucais e outras células de fácil obtenção, cultivo e passíveis de análise cariológica. Este é um método importante para determinar doenças hereditárias sexuais e cromossômicas em humanos.

A base do método citogenético é o estudo da morfologia dos cromossomos individuais das células humanas. O atual estágio de conhecimento da estrutura dos cromossomos é caracterizado pela criação de modelos moleculares dessas estruturas nucleares mais importantes e pelo estudo do papel dos componentes individuais dos cromossomos no armazenamento e transmissão de informações hereditárias.

As alterações no cariótipo geralmente estão associadas ao desenvolvimento de doenças genéticas. Graças ao cultivo de células humanas, é possível obter rapidamente material suficientemente grande para a preparação de medicamentos. Para cariótipo, geralmente é usada uma cultura de curto prazo de leucócitos do sangue periférico.

Métodos citogenéticos também são usados para descrever células em interfase. Por exemplo, pela presença ou ausência de cromatina sexual (corpos de Barr, que são cromossomos X inativados), é possível não apenas determinar o sexo dos indivíduos, mas também identificar algumas doenças genéticas associadas a alterações no número de cromossomos X. .

O método permite identificar o cariótipo (característica estrutural e número de cromossomos) registrando um cariograma. Um estudo citogenético é realizado no probando, seus pais, parentes ou feto se houver suspeita de síndrome cromossômica ou outro distúrbio cromossômico.

Cariótipo– método citogenético - permitindo identificar desvios na estrutura e no número de cromossomos que podem causar infertilidade, outras doenças hereditárias e o nascimento de uma criança doente.

Na genética médica, dois tipos principais de cariótipo são importantes:

estudando o cariótipo de pacientes
cariótipo pré-natal - estudo dos cromossomos fetais

Método citogenético para estudar a genética humana. Determinação da cromatina X e Y. A importância do método de diagnóstico de doenças cromossômicas associadas a violações do número de cromossomos sexuais no cariótipo.

Determinação da cromatina X e Y frequentemente chamado de método de diagnóstico expresso de gênero. Células da mucosa oral, epitélio vaginal ou folículo piloso são examinadas. Nos núcleos das células femininas do conjunto diplóide existem dois cromossomos X, um dos quais está completamente inativado (espiralizado, fortemente compactado) já nos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário e é visível na forma de um aglomerado de heterocromatina ligado ao membrana nuclear. O cromossomo X inativado é chamado de cromatina sexual ou corpo de Barr. Para detectar a cromatina X sexual (corpos de Barr) nos núcleos das células, os esfregaços são corados com acetarseína e as preparações são visualizadas usando um microscópio óptico convencional. Normalmente, as mulheres têm um pedaço de cromatina X, mas os homens não.

Para identificar a cromatina do sexo Y masculino (corpo F), os esfregaços são corados com quinina e visualizados em um microscópio fluorescente. A cromatina Y é detectada como um ponto fortemente luminoso, diferindo em tamanho e intensidade de outros cromocentros. É encontrado nos núcleos das células do corpo masculino.

A ausência do corpo de Barr nas mulheres indica uma doença cromossômica - síndrome de Shereshevsky-Turner (cariótipo 45, X0). A presença de corpos de Barr em homens indica síndrome de Klinefelter (cariótipo 47, XXY).

A determinação da cromatina X e Y é um método de triagem, o diagnóstico final da doença cromossômica é feito somente após o estudo do cariótipo.

Método citogenético

O método citogenético é utilizado para estudar o cariótipo humano normal, bem como para diagnosticar doenças hereditárias associadas a mutações genômicas e cromossômicas.
Além disso, este método é usado para estudar os efeitos mutagênicos de vários produtos químicos, pesticidas, inseticidas, drogas, etc.
Durante o período de divisão celular na fase de metáfase, os cromossomos apresentam uma estrutura mais clara e ficam disponíveis para estudo. O conjunto diplóide humano consiste em 46 cromossomos:
22 pares de autossomos e um par de cromossomos sexuais (XX - nas mulheres, XY - nos homens). Normalmente, os leucócitos do sangue periférico humano são examinados e colocados em um meio nutriente especial onde se dividem. Em seguida, são preparadas preparações e analisado o número e a estrutura dos cromossomos. O desenvolvimento de métodos especiais de coloração simplificou muito o reconhecimento de todos os cromossomos humanos e, em combinação com o método genealógico e os métodos de engenharia celular e genética, tornou possível correlacionar genes com seções específicas de cromossomos. A aplicação integrada destes métodos está na base do mapeamento dos cromossomos humanos.

O controle citológico é necessário para o diagnóstico de doenças cromossômicas associadas à ansuploidia e mutações cromossômicas. As mais comuns são a doença de Down (trissomia do cromossomo 21), síndrome de Klinefelter (47 XXY), síndrome de Shershevsky-Turner (45 XO), etc. doença do sangue - leucemia mieloide crônica.

Estudos citológicos de núcleos interfásicos de células somáticas podem detectar o chamado corpo de Barr, ou cromatina sexual. Descobriu-se que a cromatina sexual está normalmente presente nas mulheres e ausente nos homens. É o resultado da heterocromatização de um dos dois cromossomos X nas mulheres. Conhecendo essa característica, é possível identificar o sexo e detectar um número anormal de cromossomos X.

A detecção de muitas doenças hereditárias é possível antes mesmo do nascimento de um filho. O método de diagnóstico pré-natal consiste na obtenção do líquido amniótico, onde se localizam as células fetais, e posterior determinação bioquímica e citológica de possíveis anomalias hereditárias. Isso permite que você faça um diagnóstico nos primeiros estágios da gravidez e tome uma decisão sobre a continuação ou interrupção.

A citogenética é um ramo independente do estudo da hereditariedade, que estuda vários portadores, principalmente observáveis (explícitos), contendo informações sobre a hereditariedade genética. Esses portadores são cromossomos de vários tipos (politênicos, mitóticos e meióticos), plastídios, núcleos interfásicos e, em menor extensão, mitocôndrias.

Com base nisso, o método citogenético é um conjunto de métodos e tecnologias para estudar, em primeiro lugar, os cromossomos, durante os quais são estabelecidos seus parâmetros quantitativos, é feita sua descrição química e biológica, e a estrutura e os modos de comportamento durante a divisão celular são estudado. A tarefa científica deste estudo é estabelecer uma conexão entre a natureza e a dinâmica das mudanças na estrutura dos cromossomos e o quadro que reflete a variabilidade das características.

Uma das áreas de pesquisa mais importantes que envolve o método citogenético é a análise do cariótipo humano. Este estudo geralmente é realizado em culturas nas quais ocorre a divisão de células germinativas e somáticas.

A cultura mais comum para esse tipo de pesquisa são as células do sangue periférico, como linfócitos, fibroblastos e células da medula óssea. A cultura mais acessível usada em citogenética médica são os linfócitos sanguíneos. A razão para isso é que, via de regra, são objeto de análise e, no caso de um feto, o método citogenético envolve a utilização de culturas celulares, cuja escolha é determinada por uma série de fatores. O principal é a duração da gravidez. Por exemplo, com este período inferior a 12 semanas, a análise citogenética dos cromossomos é melhor realizada com a participação de células coriônicas, e com um período de gravidez superior a 12 semanas, é aconselhável considerar as células do próprio feto para pesquisa . Para tanto, são especialmente isolados da placenta e do sangue fetal.

Para estabelecer um cariótipo, a hereditariedade citogenética requer a obtenção de uma amostra de sangue em uma quantidade de pelo menos 1-2 ml. Além disso, o próprio método envolve a realização de pesquisas que consistem em três etapas principais:

Isolamento e sobre o qual será realizada a análise;

Coloração da preparação;

Realização de uma análise minuciosa do medicamento ao microscópio.

O método citogenético da genética só pode ser eficaz quando as seguintes condições forem atendidas. Primeiro, deve haver um certo número de células que estão no estágio de metáfase. Em segundo lugar, o cultivo deve ser realizado estritamente de acordo com as regras estabelecidas e por um período mínimo de 72 horas. Em terceiro lugar, a fixação celular deve ser realizada com uma solução de metanol numa proporção estrita destas substâncias 3:1.

Na etapa de coloração do preparo, a escolha das cores é feita levando em consideração o próprio objetivo do estudo, ou seja, que tipo de rearranjos precisam ser estudados. Na maioria das vezes, é utilizado o método de coloração contínua, por ser o mais simples para determinar o parâmetro quantitativo dos cromossomos. A pesquisa moderna utiliza principalmente esse método de coloração para determinar anormalidades cariotípicas em sua expressão quantitativa. Mas este método citogenético não permite determinar e revelar a dinâmica estrutural dos cromossomos. Portanto, são utilizados outros métodos especiais que permitem neutralizar esta desvantagem do método de coloração contínua. Os mais comuns deles, como método de coloração diferenciada, método G, método R e outros.

E por fim, a terceira etapa do estudo consiste no exame microscópico dos cromossomos corados que estão em fase de metáfase. Durante ele, é determinado o número de células normais e anormais no corpo fetal humano. Para isso, via de regra, vários tecidos são analisados.

Para determinar o cariótipo, são utilizados métodos de pesquisa diretos e indiretos. No primeiro caso, o material retirado da medula óssea, gânglios linfáticos, tecidos embrionários, córion, células do líquido amniótico ou outros tecidos é estudado imediatamente após o recebimento. Porém, o método direto só é informativo quando o material contém um número suficiente de metáfases mitóticas, pois somente nesta fase os cromossomos adquirem suas características estruturais inerentes e sua identificação precisa é possível. Atualmente, métodos indiretos de pesquisa são amplamente utilizados.

Método de preparação de placas metafásicas. A cultura colhida (linfócitos do sangue periférico, etc.) é colocada em meio nutriente para cultivo. Normalmente, a mitose dos linfócitos não é observada no sangue periférico, por isso são utilizados medicamentos (fitohemaglutinina) que estimulam a transformação imunológica dos linfócitos e sua divisão. O segundo estágio é a interrupção da divisão celular mitótica no estágio de metáfase. Isto é conseguido adicionando colchicina ou colcimed à cultura de tecidos 2-3 horas antes do final da cultura. No terceiro estágio, usando uma solução hipotônica de cloreto de cálcio ou citrato de sódio, consegue-se a hipotonicidade das células, como resultado a célula incha, a membrana nuclear se rompe, as ligações intercromossômicas são quebradas e os cromossomos flutuam livremente no citoplasma. A seguir, a cultura resultante é fixada com uma mistura de metanol e ácido acético, centrifugada e trocado o fixador. A suspensão com fixador é aplicada em uma lâmina de vidro limpa, onde a placa metafásica é endireitada e os cromossomos individuais estão localizados dentro dela. À medida que o fixador seca, a célula fica firmemente presa ao vidro. Assim, independentemente da cultura celular da qual foram obtidas as placas metafásicas, o princípio geral de obtenção das preparações é o seguinte: acúmulo de metáfases, hipotonização, fixação, queda em lâmina de vidro.

Coloração da preparação. A coloração das preparações é a próxima etapa após a obtenção das placas metafásicas e é dividida em simples, diferenciada e fluorescente. Cada tipo de coloração é usado para detectar apenas certas alterações no cariótipo. Com coloração simples (método de coloração Giemsa), apenas a identificação de grupo de cromossomos é possível, portanto este método é usado para uma determinação aproximada de anomalias numéricas de cariótipo. A coloração simples é amplamente utilizada para estudar a mutagênese cromossômica ao testar fatores ambientais para mutação. A coloração de Giemsa cora todos os cromossomos uniformemente ao longo de todo o seu comprimento, enquanto contorna o centrômero, os satélites e as constrições secundárias. A coloração diferencial é devida à capacidade de coloração seletiva ao longo do comprimento e é garantida por efeitos relativamente simples do sal de temperatura nos cromossomos fixos. Nesse caso, revela-se a diferenciação estrutural dos cromossomos ao longo do comprimento, expressa na forma de alternância de regiões eu e heterocromáticas (escuras e claras), que são específicas para cada cromossomo, braço e região correspondentes. A coloração G é a mais comumente usada. Neste caso, os cromossomos são pré-tratados com protease ou solução salina. Para estudar o processo de mutação em humanos, o método de coloração diferencial de cromátides irmãs é amplamente utilizado, baseado na capacidade do análogo timidina-5-bromodeoxiuridina de ser incluído na sequência de replicação cromossômica. As regiões cromossômicas que incluem esse análogo são mal coradas, portanto, usando esse método, qualquer cromossomo ou rearranjo cromossômico pode ser identificado.

Estudo da cromatina sexual. O método de determinação da cromatina sexual é mais rápido e simples do que o estudo do conjunto de cromossomos (cariótipo), por isso é utilizado como um dos testes de triagem para pesquisas populacionais em massa. Normalmente, nas células do corpo feminino, com certos métodos de coloração, um corpo intensamente corado é formado próximo à membrana nuclear - cromatina sexual, ou corpo de Barr, que é formado por um cromossomo X inativo. O outro cromossomo X está ativo nas células do corpo feminino. Os homens possuem apenas um cromossomo X, e ele está sempre ativo, portanto a cromatina sexual não é detectada nos núcleos das células do corpo masculino. Para estudar a cromatina sexual X, geralmente é feita uma raspagem da mucosa oral. O método expresso mais comum é a coloração de Sanders usando uma solução de ácido acético acetoorceína a 2% seguida de microscopia de imersão. Além disso, em neutrófilos sanguíneos maduros, a chamada coxinha também é detectada, e os corpos da cromatina e as baquetas são um a menos que o número de cromossomos X. Nos neutrófilos dos homens, também são detectadas formações perinucleares na forma de “fios” e “cabelos”. O desaparecimento do cromossomo X inativo nas mulheres leva à ausência da cromatina sexual. O aparecimento de um cromossomo X adicional em um homem leva à formação de um corpo de cromatina sexual.

Indicações para exame citogenético do paciente:

1) múltiplos defeitos de desenvolvimento (envolvendo três ou mais sistemas); os distúrbios mais permanentes são as malformações do cérebro, do sistema músculo-esquelético, do coração e do sistema geniturinário;
2) retardo mental combinado com distúrbios do desenvolvimento físico, displasia, hipogenitalismo;
3) infertilidade primária persistente em homens e mulheres, com exceção de patologia ginecológica e urológica;
4) aborto espontâneo de repetição, principalmente nos estágios iniciais;
5) violação do desenvolvimento sexual (hipogonadismo, inversão sexual);
6) baixo peso de uma criança nascida durante a gravidez a termo.

O uso do método citogenético na genética clínica levou ao desenvolvimento de uma nova direção - a citogenética clínica, que permite:

- estabelecer a origem dos cromossomas estruturalmente rearranjados e a sua classificação exacta;
- identificar síndromes causadas por desequilíbrio em áreas de cromossomos individuais;
- acumular informações sobre alterações cromossômicas em células tumorais, em pacientes com doenças hereditárias do sangue, etc.

A base do método é um estudo microscópico do cromossomo. Os estudos citológicos tornaram-se amplamente utilizados desde o início da década de 20. Século XX. para estudar a morfologia dos cromossomos, cultura de leucócitos para obtenção de placas metafásicas.

O desenvolvimento da citogenética humana moderna está associado aos nomes dos citologistas D. Tio e A. Levan. Em 1956, foram os primeiros a estabelecer que os humanos têm 46 cromossomos, que marcou o início de um amplo estudo dos cromossomos mitóticos e meióticos humanos.

Em 1959, os cientistas franceses D. Lejeune, R. Turpin e M. Gautier estabeleceram a natureza cromossômica da doença de Down. Nos anos seguintes, foram descritas muitas outras síndromes cromossômicas comumente encontradas em humanos. A citogenética tornou-se o ramo mais importante da medicina prática. Atualmente, o método citogenético é utilizado para diagnosticar doenças cromossômicas, compilar mapas genéticos de cromossomos, estudar o processo de mutação e outros problemas da genética humana.

Em 1960, a primeira Classificação Internacional de Cromossomos Humanos foi desenvolvida em Denver. Baseia-se no tamanho dos cromossomos e na posição da constrição primária - o centrômero. Todos os cromossomos são divididos por formato em metacêntrico, submetacêntrico e acrocêntrico e divididos em 7 grupos, designados pelas letras latinas A, B, C, D, E, F, G. Cada par de cromossomos recebeu um número de série de 1 a 22 , destacados separadamente e nomeados em letras latinas - cromossomos sexuais X e Y.

Em 1971, na Conferência de Genética de Praga, além da classificação de Denver, foram apresentados métodos de coloração diferencial dos cromossomos, graças aos quais cada cromossomo adquire seu padrão único, o que auxilia na identificação precisa.

Informações básicas sobre a morfologia dos cromossomos humanos foram obtidas estudando-os nas metáfases da mitose e na prófase - metáfase da meiose. É importante que o número de células em divisão seja alto. O trabalho citogenético mais importante foi realizado em linfócitos do sangue periférico, pois o cultivo de linfócitos por 2 a 3 dias na presença de fitohemaglutinina permite a obtenção de placas metafásicas para análise cromossômica.

Placas metafásicas de camada única com cromossomos separados são submetidas à análise citogenética. Para fazer isso, as células em divisão são tratadas com colchicina e certos produtos químicos.

Uma etapa importante da análise citogenética é a coloração das preparações resultantes. É realizado usando métodos diferenciais e fluorescentes simples.

Os avanços na citogenética molecular humana possibilitam o desenvolvimento de novos métodos para o estudo dos cromossomos. Assim, vale destacar o método de hibridização fluorescente, que permite estudar uma ampla gama de questões: desde a localização de genes até a decifração de rearranjos complexos entre vários cromossomos.

Assim, a combinação de métodos citogenéticos e de genética molecular na genética humana torna quase ilimitadas as possibilidades de diagnóstico de anomalias cromossômicas.

A citogenética é um ramo da genética que estuda os padrões de hereditariedade e variabilidade ao nível das células e estruturas subcelulares, principalmente cromossomas. Os métodos citogenéticos são projetados para estudar a estrutura de um conjunto de cromossomos ou de cromossomos individuais. A base dos métodos citogenéticos é o estudo microscópico dos cromossomos humanos. Métodos microscópicos para estudar cromossomos humanos começaram a ser utilizados no final do século XIX. O termo "citogenética" foi introduzido em 1903 por William Sutton.

Os estudos citogenéticos tornaram-se amplamente utilizados desde o início dos anos 20. Século XX estudar a morfologia dos cromossomos humanos, contar cromossomos, cultivar leucócitos para obter placas metafásicas. Em 1959, os cientistas franceses D. Lejeune, R. Turpin e M. Gautier estabeleceram a natureza cromossômica da doença de Down. Nos anos seguintes, foram descritas muitas outras síndromes cromossômicas comumente encontradas em humanos. Em 1960, R. Moorhead et al. desenvolveram um método de cultura de linfócitos do sangue periférico para obtenção de cromossomos metafásicos humanos, o que possibilitou detectar mutações cromossômicas características de certas doenças hereditárias.

Aplicação de métodos citogenéticos: estudo do cariótipo humano normal, diagnóstico de doenças hereditárias associadas a mutações genômicas e cromossômicas, estudo do efeito mutagênico de diversos produtos químicos, pesticidas, inseticidas, drogas, etc. células meióticas e interfásicas.

MÉTODOS CITOGENÉTICOS Microscopia óptica Microscopia eletrônica Microscopia confocal Microscopia de luminescência Microscopia de fluorescência

Indicações para estudos citogenéticos Suspeita de doença cromossômica com base em sintomas clínicos (para confirmar o diagnóstico) Presença de múltiplas malformações congênitas na criança que não estão relacionadas à síndrome genética Repetidos abortos espontâneos, natimortos ou nascimentos de crianças com malformações congênitas Prejuízos reprodutivos função de origem desconhecida em mulheres e homens Retardo mental significativo e desenvolvimento físico da criança

Diagnóstico pré-natal (por idade, pela presença de translocação nos pais, no nascimento de filho anterior com doença cromossômica) Suspeita de síndromes caracterizadas por instabilidade cromossômica Leucemia (para diagnóstico diferencial, avaliação da eficácia do tratamento e prognóstico do tratamento) Avaliação de efeitos mutagênicos de vários produtos químicos, pesticidas, inseticidas, medicamentos, etc.

Durante o período de divisão celular na fase de metáfase, os cromossomos apresentam uma estrutura mais clara e ficam disponíveis para estudo. Normalmente, os leucócitos do sangue periférico humano são examinados e colocados em um meio nutriente especial onde se dividem. Em seguida, são preparadas preparações e analisado o número e a estrutura dos cromossomos.

Estudos citogenéticos de células somáticas Preparação de preparações de cromossomos mitóticos Coloração de preparações (simples, diferencial e fluorescente) Métodos citogenéticos moleculares - método de hibridização colorida in situ (FISH)

Os métodos citogenéticos utilizados na prática clínica incluem: - métodos clássicos de cariótipo; - métodos citogenéticos moleculares. Até recentemente, o diagnóstico de doenças cromossômicas baseava-se na utilização de métodos tradicionais de análise citogenética.

Para estudar os cromossomos, as preparações de hemocultura de curto prazo são mais frequentemente usadas, bem como células da medula óssea e culturas de fibroblastos. O sangue com um anticoagulante é centrifugado para sedimentar os eritrócitos e os leucócitos são incubados em meio de cultura por 2-3 dias. A fitohemaglutinina é adicionada à amostra de sangue porque acelera a aglutinação dos glóbulos vermelhos e estimula a divisão dos linfócitos. A fase mais adequada para o estudo dos cromossomos é a metáfase da mitose, por isso a colchicina é usada para interromper a divisão dos linfócitos nesta fase. A adição desse medicamento a uma cultura aumenta a proporção de células que estão em metáfase, ou seja, na fase do ciclo celular em que os cromossomos são mais visíveis. Cada cromossomo é replicado e, após coloração apropriada, é visível como duas cromátides ligadas ao centrômero, ou constrição central. As células são então tratadas com solução hipotônica de cloreto de sódio, fixadas e coradas. Para colorir os cromossomos, o corante Romanovsky-Giemsa, acetcarmim a 2% ou acetarseína a 2% são os mais usados. Eles coram os cromossomos inteiramente e uniformemente (método de rotina) e podem ser usados para detectar anormalidades cromossômicas numéricas.

Classificação de Denver dos cromossomos humanos (1960). Grupo A (1-3) - três pares dos maiores cromossomos: dois metacêntricos e 1 submetacêntrico. Grupo B – (4-5) – dois pares de longos cromossomos submetacêntricos. Grupo C (6 -12) – 7 pares de autossomos submetacêntricos de tamanho médio e um cromossomo X. Grupo D (13 -15) – três pares de cromossomos acrocêntricos médios. Grupo E (16 -18) – três pares de cromossomos metacêntricos e submetacêntricos. Grupo F (19 -20) - dois pares de pequenos cromossomos metacêntricos. Grupo G (21 -22 e Y) - dois pares de pequenos cromossomos acrocêntricos e um cromossomo Y.

1. Coloração de rotina (uniforme) 2. Usada para analisar o número de cromossomos e identificar distúrbios estruturais (aberrações). Com coloração de rotina, apenas um grupo de cromossomos pode ser identificado de forma confiável; com coloração diferencial, todos os cromossomos podem ser identificados

Idiograma dos cromossomos humanos de acordo com as classificações de Denver e Paris A B C E D F G

Métodos de coloração diferencial de cromossomos Q-coloração - coloração de Kaspersson com acrichiniprit com exame em microscópio fluorescente. Mais frequentemente usado para estudar cromossomos Y. A coloração G é uma coloração Romanovsky-Giemsa modificada. A sensibilidade é superior à da coloração Q, portanto é utilizada como método padrão para análise citogenética. Usado para identificar pequenas aberrações e cromossomos marcadores (segmentados de maneira diferente dos cromossomos homólogos normais). Coloração R - laranja de acridina e corantes semelhantes são usados, e áreas de cromossomos que são insensíveis à coloração G são coradas. Coloração C - usada para analisar as regiões centroméricas dos cromossomos contendo heterocromatina constitutiva. Coloração T - usada para analisar regiões teloméricas dos cromossomos.

Áreas de condensação forte e fraca ao longo do comprimento do cromossomo são específicas de cada cromossomo e possuem intensidades de cor diferentes.

Hibridização in situ fluorescente (FISH) - cariótipo espectral, que consiste na coloração dos cromossomos com um conjunto de corantes fluorescentes que se ligam a regiões específicas dos cromossomos. Como resultado dessa coloração, pares homólogos de cromossomos adquirem características espectrais idênticas, o que facilita muito a identificação de tais pares e a detecção de translocações intercromossômicas, ou seja, movimentos de seções entre cromossomos - as seções translocadas possuem um espectro diferente do espectro do restante do cromossomo.

Hibridização in situ por fluorescência (FISH) A hibridização in situ por fluorescência, ou método FISH, é um método citogenético usado para detectar e determinar a posição de uma sequência de DNA específica em cromossomos em metáfase ou em núcleos em interfase in situ. A hibridização fluorescente in situ utiliza sondas de DNA (sondas de DNA) que se ligam a alvos complementares na amostra. As sondas de DNA contêm nucleosídeos marcados com fluoróforos (rotulagem direta) ou conjugados como biotina ou digoxigenina (rotulagem indireta).

Determinação da translocação t(9; 22)(q 34; q 11) na leucemia mieloide crônica pelo método FISH, o gene ABL 1 (cromossomo 9) é combinado com o gene BCR (cromossomo 22) - um gene quimérico BCR-ABL 1 é formada a placa metafásica com o cromossomo Filadélfia. Os cromossomos são coloridos em azul, o locus ABL 1 é vermelho, o locus BCR é verde. No canto superior esquerdo está um cromossomo com um rearranjo, marcado com um ponto vermelho-verde.

Multicolor FISH é o cariótipo espectral, que consiste na coloração dos cromossomos com um conjunto de corantes fluorescentes que se ligam a regiões específicas dos cromossomos. Como resultado dessa coloração, pares homólogos de cromossomos adquirem características espectrais idênticas, o que facilita muito a identificação de tais pares e a detecção de translocações intercromossômicas, ou seja, movimentos de seções entre cromossomos - as seções translocadas possuem um espectro diferente do espectro do restante do cromossomo.

Cariótipo 46, XY, t(1; 3)(p 21; q 21), del(9)(q 22) Translocação entre o 1º e o 3º cromossomos, deleção do 9º cromossomo. A marcação das regiões cromossômicas é dada tanto por complexos de marcas transversais (cariótipo clássico, listras) quanto por espectro de fluorescência (cor, cariótipo espectral).